Vol. XXVIII Issue 2
Article 3

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd"><!-- [et_pb_line_break_holder] --><html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml"><!-- [et_pb_line_break_holder] --><head><!-- [et_pb_line_break_holder] --><meta http-equiv="Content-Type" content="text/html; charset=iso-8859-1" /><!-- [et_pb_line_break_holder] --><title>Untitled Document</title><!-- [et_pb_line_break_holder] --></head><!-- [et_pb_line_break_holder] --><!-- [et_pb_line_break_holder] --><body><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p align="right"><font size="3" face="Arial, Helvetica, sans-serif"><strong>ARTÍCULOS ORIGINALES</strong></font></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><font size="4" face="Arial, Helvetica, sans-serif"><strong>Un método molecular rápido, no invasivo y simple para</strong> <!-- [et_pb_line_break_holder] --> <strong>determinar el sexo en pingüinos pigoscélidos</strong></font></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><i><font size="3" face="Arial, Helvetica, sans-serif"><strong>A rapid, non invasive and simple molecular method for sex</strong> <strong>determination in pygoscelis penguins</strong></font></i></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p> </p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><b><font size="3" face="Arial, Helvetica, sans-serif">Santos M.R.<sup>1*</sup>, Santos M.M.<sup>2,3</sup>, Terán E.M.<sup>1</sup>, Bailliet G.<sup>1</sup>, Juáres M.A.<sup>2,3</sup></font></b></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><font size="2" face="Arial, Helvetica, sans-serif"><sup>1</sup> Instituto Multidisciplinario de Biología Celular, Calle 526 y Camino General Belgrano, B1900BTE, La Plata, Buenos Aires, Argentina.<br /><!-- [et_pb_line_break_holder] --> <sup>2</sup> Departamento Biología de Predadores Tope, Instituto Antártico Argentino, 25 de Mayo 1143, B1650 CSP, <!-- [et_pb_line_break_holder] --> San Martín, Buenos Aires, Argentina.<br /><!-- [et_pb_line_break_holder] --> <sup>3</sup> Laboratorios Anexos, Facultad de Ciencias Naturales y Museo, Universidad Nacional de La Plata, Calle 64 Nº 3, B1904AMA, La Plata, <!-- [et_pb_line_break_holder] --> Buenos Aires, Argentina.<br /><!-- [et_pb_line_break_holder] --> *Autor correspondiente: <a href="mailto:mritasantos@yahoo.com.ar">mritasantos@yahoo.com.ar</a></font></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><font size="2" face="Arial, Helvetica, sans-serif"><b>Fecha de recepción</b>: 11/04/2017<br /><!-- [et_pb_line_break_holder] --> <b>Fecha de aceptación de versión final</b>: 21/07/2017</font></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><hr /><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><font size="2" face="Arial, Helvetica, sans-serif"><b>RESUMEN</b></font></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><font size="2" face="Arial, Helvetica, sans-serif">En los pingüinos Adélie (<em>Pygoscelis adeliae</em>) y pingüinos gentoo (<em>Pygoscelis papua</em>), no existe un dimorfismo sexual conspicuo y a menudo<!-- [et_pb_line_break_holder] --> resulta difícil determinar el sexo en base a la morfología externa. La información sobre el sexo es importante en muchos estudios de ecología y<!-- [et_pb_line_break_holder] --> conservación. En este artículo se evaluó el uso de un par de cebadores (2550F/2718R) para identificar el sexo en aves sexualmente monomórficas.<!-- [et_pb_line_break_holder] --> Para ambas especies de pingüinos la amplificación produjo dos bandas discretas, <em>CHD1Z </em>y <em>CHD1W</em>, que permitieron la identificación sexual. Se<!-- [et_pb_line_break_holder] --> trata de un sistema sencillo, rápido y económico para el sexaje molecular de los pingüinos gentoo y Adélie.</font></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><font size="2" face="Arial, Helvetica, sans-serif"><b>Palabras clave</b>: Gen <em>CHD</em>; Sexado molecular; Pingüinos</font>.</p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><b><font size="2" face="Arial, Helvetica, sans-serif">ABSTRACT</font></b></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><font size="2" face="Arial, Helvetica, sans-serif"> In Adélie penguins (<em>Pygoscelis adeliae</em>) and gentoo penguins (<em>Pygoscelis papua</em>), the conspicuous sexual dimorphism often makes it difficult to<!-- [et_pb_line_break_holder] --> determine sex on the basis of external morphology. The information about sex is important in many ecology and conservation studies. In this<!-- [et_pb_line_break_holder] --> paper we evaluated the use of an established primer pair (2550F/2718R) to identify sex in sexually monomorphic birds. In both penguin species,<!-- [et_pb_line_break_holder] --> it resulted in two distinct <em>CHD1Z </em>and <em>CHD1W </em>PCR bands, allowing sex identification. This is a simple, rapid and cheap system for molecular<!-- [et_pb_line_break_holder] --> sexing of gentoo and Adélie penguins.</font></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><font size="2" face="Arial, Helvetica, sans-serif"><b>Key words</b>: <em>CHD </em>gene; Sex identification; Penguins</font>.</p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><hr /><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p> </p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><font size="3" face="Arial, Helvetica, sans-serif"><b>INTRODUCCIÓN</b></font></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><font size="3" face="Arial, Helvetica, sans-serif">Un parámetro biológico central en el estudio de cualquier<!-- [et_pb_line_break_holder] --> población animal es la asignación precisa del sexo. En los<!-- [et_pb_line_break_holder] --> pingüinos, los machos son ligeramente más grandes que las<!-- [et_pb_line_break_holder] --> hembras, pero muy similares, si no idénticos, en la coloración<!-- [et_pb_line_break_holder] --> del plumaje (Renner y Davis, 1991). Asimismo, muchas<!-- [et_pb_line_break_holder] --> especies de pingüinos muestran una considerable variación<!-- [et_pb_line_break_holder] --> geográfica en el tamaño corporal (Williams, 1995). En<!-- [et_pb_line_break_holder] --> particular, el género <em>Pygoscelis </em>muestra sólo un dimorfismo<!-- [et_pb_line_break_holder] --> sexual leve (Agnew y Kerry, 1995). El objetivo principal de<!-- [et_pb_line_break_holder] --> este trabajo fue evaluar la utilidad en la determinación del<!-- [et_pb_line_break_holder] --> sexo de un par de cebadores establecidos (2550F/2718R)<!-- [et_pb_line_break_holder] --> (Fridolfsson y Ellegren, 1999) en pingüinos gentoo y<!-- [et_pb_line_break_holder] --> Adélie. Estos cebadores amplifican la región del gen<!-- [et_pb_line_break_holder] --> cromo-helicase de unión al ADN (<em>CHD</em>), el cual está<!-- [et_pb_line_break_holder] --> ligado al cromosoma Z como al W. <em>CHD </em>se encuentra<!-- [et_pb_line_break_holder] --> muy conservado y estos cebadores reconocen secuencias<!-- [et_pb_line_break_holder] --> nucleotídicas exónicas. Esto permite observar diferencias<!-- [et_pb_line_break_holder] --> de tamaño en los productos amplificados del gen <em>CHD </em>en<!-- [et_pb_line_break_holder] --> los cromosomas W y Z, debido a que presentan longitudes<!-- [et_pb_line_break_holder] --> diferentes en los intrones.<!-- [et_pb_line_break_holder] --> <br /><!-- [et_pb_line_break_holder] --> Para esta especie, el sexado molecular es un método atractivo<!-- [et_pb_line_break_holder] --> ya que potencialmente puede proporcionar un medio preciso,<!-- [et_pb_line_break_holder] --> no invasivo y rápido para la identificación sexual (Lessells y<!-- [et_pb_line_break_holder] --> Mateman, 1996; Fridolfsson y Ellegren, 1999).</font></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><b><font size="3" face="Arial, Helvetica, sans-serif">MATERIALES Y MÉTODOS</font></b></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><font size="3" face="Arial, Helvetica, sans-serif">Analizamos 46 ejemplares de <em>Pygoscelis papua </em>y 141 de<!-- [et_pb_line_break_holder] --> <em>Pygoscelis adeliae </em>de la colonia Punta Stranger, 25 de Mayo,<!-- [et_pb_line_break_holder] --> Isla King George (62° 16’ S, 58° 37’ W), Islas Shetland del<!-- [et_pb_line_break_holder] --> Sur, dentro del Arrecife Antártico Especialmente Protegido<!-- [et_pb_line_break_holder] --> N° 132 (“Península de Potter”) durante la temporada<!-- [et_pb_line_break_holder] --> 2011-2012. En esta colonia, aproximadamente 3.700 pares<!-- [et_pb_line_break_holder] --> de Adélie y 4.990 pares de pingüinos gentoo se reproducen<!-- [et_pb_line_break_holder] --> simpátricamente (Juáres <em>et al.</em>, 2016). Extrajimos una gota<!-- [et_pb_line_break_holder] --> de sangre de la membrana interdigital y se almacenó en<!-- [et_pb_line_break_holder] --> papel FTA®. Se incubó un disco de papel de 5 mm de<!-- [et_pb_line_break_holder] --> diámetro en 100 ml de NaOH 50 mM a 99 º C y luego se<!-- [et_pb_line_break_holder] --> enfrió a 4º C. La PCR se realizó en un volumen final de<!-- [et_pb_line_break_holder] --> 20 μl con 10 x buffer (Invitrogen); 1,5 mMMgCl2, 200 μM<!-- [et_pb_line_break_holder] --> DNTPS; 2,5 U de polimerasa TaqDna y 0,25 picomoles<!-- [et_pb_line_break_holder] --> de cada cebador, 1 μl (20 ng) de ADN molde y agua<!-- [et_pb_line_break_holder] --> destilada hasta alcanzar el volumen final. El perfil térmico<!-- [et_pb_line_break_holder] --> comprendió una etapa de desnaturalización inicial de 94º<!-- [et_pb_line_break_holder] --> C durante 2 min, seguida de un ciclo único de 2 min a<!-- [et_pb_line_break_holder] --> 94º C, 30 s a 5º C y 1 min a 72º C y 36 ciclos de 30 s a<!-- [et_pb_line_break_holder] --> 92º C, 30 s a 50º C, 45 s a 72 º C. Se añadió una etapa de<!-- [et_pb_line_break_holder] --> extensión final de 72º C durante 5 min después del último<!-- [et_pb_line_break_holder] --> ciclo. Los productos amplificados se separaron en gel de<!-- [et_pb_line_break_holder] --> agarosa al 1% y se detectaron con <em>GelRed</em>TM.</font></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><b><font size="3" face="Arial, Helvetica, sans-serif">RESULTADOS</font></b></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><font size="3" face="Arial, Helvetica, sans-serif">Los cebadores 2550F/2718R (Fridolfsson y Ellegren,<!-- [et_pb_line_break_holder] --> 1999), diseñados para detectar diferencias de intrones en<!-- [et_pb_line_break_holder] --> <em>CHD1W </em>y <em>CHD1Z </em>mostraron diferencias de tamaño, y el<!-- [et_pb_line_break_holder] --> sexo pudo determinarse en todos los individuos. Se obtuvo<!-- [et_pb_line_break_holder] --> una única banda de machos y dos en hembras en geles de<!-- [et_pb_line_break_holder] --> agarosa al 1%. Los tamaños estimados de las bandas fueron<!-- [et_pb_line_break_holder] --> 663 y 743 pares de bases para <em>CHD1Z </em>y <em>CHD1W </em>genes<!-- [et_pb_line_break_holder] --> respectivamente (<a href="#fig1">Figura 1</a>).</font></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><a name="fig1" id="fig1"></a></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p align="center"><font size="2" face="Arial, Helvetica, sans-serif"><b><img src="https://sag.org.ar/jbag/wp-content/uploads/2019/11/xxviii2a03fig1.jpg" width="397" height="260" /><br /><!-- [et_pb_line_break_holder] --> Figura 1</b>. Electroforesis en gel de agarosa de los productos<!-- [et_pb_line_break_holder] --> de PCR. Las tres primeras calles corresponden a <em>Pygoscelis adeliae </em>y las subsiguientes a <em>Pygoscelis</em> <em>papua. </em>Las hembras (H) son identificadas por la<!-- [et_pb_line_break_holder] --> presencia de dos bandas y los machos (M) por<!-- [et_pb_line_break_holder] -->sólo una.</font></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><b><font size="3" face="Arial, Helvetica, sans-serif">DISCUSIÓN</font></b></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><font size="3" face="Arial, Helvetica, sans-serif">De acuerdo con Dubiec y Zagalska-Neubauer (2006), el<!-- [et_pb_line_break_holder] --> sexado molecular en estas especies basado en la técnica<!-- [et_pb_line_break_holder] --> <em>CHD </em>es preciso, fácil, relativamente barato y rápido. El<!-- [et_pb_line_break_holder] --> procesamiento de una muestra incluyendo la extracción<!-- [et_pb_line_break_holder] --> de ADN, la PCR y la resolución de los productos de<!-- [et_pb_line_break_holder] --> PCR en un gel puede tardar menos de 5 h. Los cebadores</font> <font size="3" face="Arial, Helvetica, sans-serif">2550F/2718R fueron adecuados para ambas especies.<!-- [et_pb_line_break_holder] --> El diseño de estos últimos es tal que el fragmento W<!-- [et_pb_line_break_holder] --> amplificado es el más pequeño, evitando así que las hembras<!-- [et_pb_line_break_holder] --> sean incorrectamente tipificadas.</font></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><b><font size="2" face="Arial, Helvetica, sans-serif">BIBLIOGRAFÍA</font></b></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><font size="2" face="Arial, Helvetica, sans-serif">1. Agnew D.J., Kerry R. (1995) Sexual dimorphism in<!-- [et_pb_line_break_holder] --> penguins. In: Dann P., Norman I., Reilly P. (Eds.): The<!-- [et_pb_line_break_holder] --> penguins. Surrey Beatty & Sons, Sydney, pp. 299-318.<!-- [et_pb_line_break_holder] --> </font></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><font size="2" face="Arial, Helvetica, sans-serif">2. Dubiec A., Zagalska-Neubauer M. (2006) Molecular<!-- [et_pb_line_break_holder] --> techniques for sex identification in birds. Biol. Lett. 43:<!-- [et_pb_line_break_holder] --> 3-12.<!-- [et_pb_line_break_holder] --> </font></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><font size="2" face="Arial, Helvetica, sans-serif">3. Fridolfsson A.K., Ellegren H. (1999) A simple and universal<!-- [et_pb_line_break_holder] --> method for molecular sexing of non-ratite birds. J. Avian<!-- [et_pb_line_break_holder] --> Biol. 30: 116-121.<!-- [et_pb_line_break_holder] --> </font></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><font size="2" face="Arial, Helvetica, sans-serif">4. Juáres M.A., Santos M., Mennucci J.A., Coria N.R.,<!-- [et_pb_line_break_holder] --> Mariano-Jelicich R. (2016) Diet composition and<!-- [et_pb_line_break_holder] --> foraging habitats of Adélie and gentoo penguins in three<!-- [et_pb_line_break_holder] --> different stages of their annual cycle. Mar. Biol. 163:105.<!-- [et_pb_line_break_holder] --> </font></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><font size="2" face="Arial, Helvetica, sans-serif">5. Lessells K., Mateman C. (1996) Molecular sexing of birds.<!-- [et_pb_line_break_holder] --> Nature 383: 761-762. </font></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><font size="2" face="Arial, Helvetica, sans-serif">6. Renner M., Davis L. (1999) Sexing little Penguins <em>Eudyptula</em><!-- [et_pb_line_break_holder] --> <em>minor </em>from Cook Strait, New Zealand using discriminant<!-- [et_pb_line_break_holder] --> function analysis. Emu 99: 74-79.<!-- [et_pb_line_break_holder] --> </font></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --><p><font size="2" face="Arial, Helvetica, sans-serif">7. Williams T.D. (1995) The penguins. Oxford University<!-- [et_pb_line_break_holder] --> Press. New York, EEUU.</font></p><!-- [et_pb_line_break_holder] --></body><!-- [et_pb_line_break_holder] --></html>
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